جهت رسم طول ناپلیوس از هر زوگ به تعداد ۲۰ عدد ناپلی زنده تهیه و با بهره گرفتن از لوگل تثبیت گردیدند. سپس روی لام کنار هم چیده شده و طول کل آنها با استریومیکروسکوپ مجهز به لوله رسم ترسیم گردید. درنهایت خطوط رسم شده توسط دستگاه Digitizer اندازه گیری و توسط برنامه نرم افزاری مربوطه به داده های عددی بر حسب میلی متر تبدیل گردیدند.
شکل ۳-۵٫ کشیدن طول کل ناپلیوس ها با استریومیکروسکوپ.
۳-۹- نمونه برداری برای تعیین میزان اسیدهای چرب

در پنج زمان مورد نظر از هر زوگ به میزان ۵/۰ گرم ناپلی (معادل ۵۰۰۰۰ ناپلی) روی صافی ۸۰ میکرونی منتقل و بعد از شستشو با آب شیر و آبگیری آنها توسط دستمال کاغذی از زیر صافی ، ناپلیوس ها با اسپاتول^[۴۱] برداشته و به درون میکروتیوب منتقل شدند و پس از درج مشخصات نمونه، تاریخ و ساعت تا زمان آنالیز در درون فریزر ۸۰- درجه سانتیگراد نگهداری شدند. برای تعیین پروفیل و میزان اسیدهای چرب، متیل استرهای اسیدهای چرب با بهره گرفتن از روش متیل استریفیکاسیون مستقیم (Lepage and Roy, 1984)، استخراج شدند.
شکل ۳-۶٫ نمونه برداری ناپلی برای اندازه گیری میزان اسیدهای چرب.
۳-۱۰- استخراج اسیدچرب
جهت بررسی اسید های چرب ابتدا ۵/۰ گرم از نمونه تر وزن و درون لوله های شیشه ای درب دار مخصوص ریخته شد. به هر کدام از لوله ها ml 5 محلول متانول/تولوئن (v/v 3:2 ) و ml5 محلول تازه تهیه شده استیل­کلراید/ متانول (v/v 1:20) به عنوان عامل استریفیکاسیون اضافه شد. درب ظروف محکم بسته و در حمام آبی°c 100 به مدت یک ساعت جوشانده شد. لوله ها هر ۱۰ دقیقه یکبار تکان داده شدند و درب لوله ها کنترل گردید (برای جلوگیری از پریدن حلال ها). بعد از اینکه لوله­ها سرد شدند محتوای لوله ها به درون فالکون های ml 50 انتقال داده و به هر یک ml5 آب دیونیزه و ml5 هگزان اضافه شد. سپس لوله ها به مدت ۵ دقیقه با دور rpm3000 سانتریفیوژ شدند و فاز بالایی محلول به وسیله پیپت پاستور به درون فالکون های تمیز ml 15 منتقل گردید و این عمل دو بار دیگر با افزودن ml 3 هگزان تکرار شد. سپس فالکون های ml 15 به مدت ۵ دقیقه با دور rpm 10000 سانتریفیوژ شدند تا آلودگی باقیمانده در ته فالکون جمع شود. محلول رویی درون فالکون ها به لوله های آزمایش منتقل و از طریق فیلتر سولفات سدیم بدون آب، آبگیری و به بالن های گلابی شکل انتقال داده شد. بالن ها توسط روتاری در دمای ˚c35 تغلیظ و حلال ها تبخیر شدند. سپس lµ ۵۰۰ ایزواکتان به عنوان حلال متیل استر و رقیق کننده داخل هر یک از بالن ها ریخته شد. درنهایت اسیدهای چرب استخراج شده توسط پیپت پاستور به درون میکروتیوب های ml 5/1 منتقل و تا زمان تزریق به دستگاه کروماتوگرافی گازی در فریزر نگهداری شدند. پس‌ از تهیه‌ محلول‌ نهایی‌ مقدار ۱ میکرولیتر از آن به‌ دستگاه‌ کروماتوگرافی‌ گازی تزریق‌ گردید‌.
نمونه ها به دستگاه کروماتوگرافی گازی (مدلAgilent technologies 7890A، ساخت آمریکا) تزریق شدند. آشکارساز این دستگاه از نوع یونیزاسیون شعله ای (FID)^[42] است که شعله آن از سوختن گاز هیدروژن با هوا تامین می گردد و از گاز نیتروژن به عنوان گاز حامل در این دستگاه استفاده می شود. در نهایت‌ اسیدهای چرب مختلف با بهره گرفتن از مقایسه زمان بازداری هر اسید چرب در ترکیب استاندارد اسیدهای چرب و نمونه ها شناسایی شدند و میزان هر اسید چرب با توجه به سطح زیر منحنی نمودار آنها نسبت به سطح زیر منحنی کل اسیدهای چرب هر نمونه‌ و متیل استر کل استخراج شده از هر گرم وزن تر آرتمیا محاسبه‌ شدند (Lepage and Roy, 1984).
شکل ۳-۷٫ دستگاه GC برای تعیین میزان اسیدهای چرب.
۳-۱۱- آنالیز آماری
قبل از مقایسه میانگین ها، ابتدا نرمال بودن داده ها به کمک آزمون کولموگروف-اسمیرنوف^[۴۳] بررسی شد. جهت تجزیه و تحلیل داده ها با توجه به تعداد تیمارهای قابل مقایسه از روش آنالیز واریانس دوطرفه^[۴۴] (Multivariate) یا tIndependent samples T-tes، نرم افزار SPSS (نسخه ۱۶) و آزمون دانکن^[۴۵] استفاده شد. در تمام بررسی ها، سطح معنی دار بودن آزمون ها ۰۵/۰> P در نظر گرفته شد.
فصل چهارم:
نتایج
۴-نتایج
تراکم های مختلف آرتمیا و غلظت های متفاوت روغن کلزا اثرات متفاوتی بر میزان طول کل و درصد بقا و میزان اسیدهای چرب ناپلیوس های آرتمیا ارومیانا و آرتمیا فرانسیسکانا غنی شده دارند که در برخی از تراکم های ناپلی و غلظت های مختلف روغن مقدار آن ها بیشتر و در تراکم ها و غلظت های خاصی میزان این فاکتورها حداقل بود. میزان طول کل و درصد بقای ناپلیوس های آرتمیا فرانسیسکانا و آرتمیا ارومیانا طی غنی سازی تحت تاثیر تراکم ها و غلظت های متفاوت در جداول ۳-۱ و ۳-۲ آمده است. همچنین پروفیل اسیدهای چرب ناپلی آرتمیا فرانسیسکانا و آرتمیا ارومیانا قبل از عمل غنی سازی در جدول ۳-۳ آورده شده است. میزان اسیدهای چرب مختلف در دو گونه نیز در جداول ۳-۴، ۳-۵، ۳-۶، ۳-۷، ۳-۸، ۳-۹، ۳-۱۰، ۳-۱۱ مورد بررسی قرار گرفته اند.
۴-۱- تغییرات میزان طول کل و درصد بقا در دو گونه آرتمیا فرانسیسکانا و آرتمیا ارومیانا با تراکم های متفاوت ناپلی و غلظت های مختلف روغن کلزا در ۵ زمان متفاوت
میانگین طول کل و درصد بقا در هر دو گونه با تراکم های ۵۰۰۰۰، ۱۰۰۰۰۰ و ۲۰۰۰۰۰ در غلظت های ۱/۰، ۲/۰ و ۳/۰ گرم در لیتر روغن کلزا به مدت ۶، ۹، ۱۲، ۱۵ و ۱۸ ساعت غنی سازی در جداول ۴-۱ و ۴-۲) آورده شده اند. لازم به ذکر است که طول اولیه آرتمیا فرانسیسکانا و آرتمیا ارومیانا به ترتیب ۵±۶۵/۰ و ۵±۵۵/۰ میلی متر بودند.
جدول ۴-۱- طول کل و درصد بقا در آرتمیا فرانسیسکانا با تراکم های متفاوت ناپلی و غلظت های مختلف روغن کلزا در ۵ زمان متفاوت (میانگین ± انحراف از معیار)