شکل 2-4- منحنی و معادله استاندارد پروتئین
2-7-6-4- آنزیم پراکسیداز (POD)
2-7-6-4-1-تهیه بافر­های سنجش
1) بافر آب اکسیژنه (H₂O₂) 225 میلی مولار: برای این منظور 450 میکرو لیتر H₂O₂ با بافر فسفات به حجم 20 میلی‌لیتر رسانده شد. محلول‌ها به عنوان سوبسترا باید در هر بار اندازه‌گیری تازه باشند.

2) بافر گایاکول 45 میلی مولار: برای این منظور 112 میکرولیتر گایاکول با بافر فسفات به حجم 20 میلی­لیتر رسانده شد.
2-7-6-4-2-تعیین فعالیت آنزیم
بافر H₂O₂ به مقدار 495 میکرولیتر و بافر گایاکول به همان مقدار در دمای پایین (ظرف حاوی یخ) با هم مخلوط شدند و به آن­ها 10 میکرولیتر عصاره آنزیمی اضافه و سپس میزان جذب در طول موج 470 نانومتر توسط دستگاه اسپکتروفتومتر (Canada BT600 Plus,)، اندازه­گيری شد. در محلول بلانک به جای عصاره آنزیمی، 10 میکرولیتر از بافر فسفات 50 میلی مولار (7 pH=) استفاده شد. فعالیت آنزیمی با بهره گرفتن از فرمول قانون بیر لامبرت و ضریب خاموشی گایاکول پراکسیداز (µM^-1c^-1m6/26)، محاسبه و فعالیت آنزیم در نهایت بر حسب µmol/g FW.min محاسبه شد .
2-7-6-5-آنزیم آسكوربات ­پراكسيداز (APX)
2-7-6-5-1-تهیه بافرهای سنجش
1) محلول بافر فسفات 25 ميلي­مولار و با pH برابر 7.
2) بافر اندازه‌گیری: این بافر حاوی بافر پتاسیم فسفات، EDTA 1/0 میلی­مولار، آسکوربیک اسید 5/0 میلی‌مولار و H₂O₂ 10 میلی‌مولار است.
2-7-6-5-2-تعیین فعاليت آنزیم
سنجش فعالیت آنزیم از طریق اندازه‌گیری اکسید شدن آسکوربات توسط دستگاه اسپکتروفتومتر (Canada BT600 Plus,)، در طول موج 290 نانومتر برای مدت زمان 1 دقیقه انجام شد. برای این منظور ابتدا نمونه بلانک (با حجم نیم ميلي‌ليتر) حاوی 490 ميكروليتر از بافر شماره 2 و 10 میکرولیتر بافرفسفات، نمونه­های عصاره (با حجم نیم ميلي‌ليتر) حاوی 490 ميكروليتر از بافر شماره 2 و 10 ميكروليتر از عصاره آنزيمي تهیه شد و پس از بهم­زدن (يعني با گذاشتن پارافيلم بر روي کووت) سرعت واكنش آنزيمي به‌صورت تغييرات جذب بر زمان (OD/min) در طول موج nm290 براي 1 دقیقه ثبت شد. فعالیت آنزیمی با ضریب خاموشی mM^-1cm^-18/2 محاسبه شد .
2-7-6-6-آنزیم کاتالاز (CAT)
2-7-6-6-1-تهیه بافرهای سنجش
محلول بافر فسفات 25 ميلي­مولار و با pH برابر 7
بافر اندازه‌گیری: این بافر حاوی بافر پتاسیم فسفات، EDTA 1/0 میلی­مولار و H₂O₂ 10 میلی مولار است.
2-7-6-6-2-تعیین فعاليت آنزیم CAT
سنجش فعالیت آنزیم کاتالاز از طریق اندازه‌گیری تجزیه آب اکسیژنه توسط دستگاه اسپکتروفتومتر (Canada BT600 Plus,)، در طول موج 240 نانومتر برای مدت زمان 1 دقیقه انجام شد. برای این منظور ابتدا نمونه بلانک (با حجم نیم ميلي‌ليتر) حاوی 495 ميكروليتر از بافر شماره 2 و 5 میکرولیتر بافر فسفات، نمونه­های عصاره (با حجم نیم ميلي‌ليتر)، حاوی 495 ميكروليتر از بافر شماره 2 و 5 ميكروليتر از عصاره آنزيمي تهیه شد و پس از بهم­زدن (يعني با گذاشتن پارافيلم بر روي کووت) سرعت واكنش آنزيمي به‌صورت تغييرات جذب بر زمان (OD/min)، در طول موج nm240 براي 1 دقیقه ثبت شد. فعالیت آنزیمی با ضریب خاموشی µM^-1c^-1m40 محاسبه شد .
2-8- عناصر معدنی ریشه و برگ
2-8- 1- تهیه خاکستر
به منظور انداره گیری عناصر غذایی، پس از اتمام دوره آزمايش، برگ­ها و ریشه­ها جدا شدند و پس از شستشوي دقيق، به مدت 48 ساعت در آون با دمای 75 درجه سانتی گراد قرار داده شدند. پس از خشك شدن برگ­ها، نمونه­ها با آسياب برقي به صورت پودر در آورده شدند. پس از تهيه خاكستر از مواد گياهي در دماي 550 درجه سانتي گراد، عصاره گيري با بهره گرفتن از 10 ميلي ليتر كلريدريك اسيد ٢ نرمال و آب مقطر و رساندن به حجم ٥٠ ميلي ليتر انجام شد ]امامی، 1375[.
2-8-2-نیتروژن
25/0 گرم از نمونه گیاهی ریشه و برگ که به صورت کاملا یکنواخت پودر شده بود، در تیوپ شیشه ای مخصوص ریخته شد و 10 میلی لیتر اسید سولفوسالیسلیک (50 گرم اسید سالیسیلیک + یک لیتر اسید سولفوریک) + دو گرم کاتالیزور (100 گرم سولفات پتاسیم + 10 گرم سولفات مس + یک گرم سلنیوم) + 20 میلی لیتر آب مقطر به آن اضافه شد. محلول­ها به مدت سه ساعت در دمای 420 درجه حرارت داده شدند تا در کف شیشه­ها، عصاره سبز رنگی باقی بماند که نشانه آماده شدن عصاره به منظور تیتراسیون بود.
سپس به هر یک از تیوپ­های شیشه ­ای، حدود 20 میلی لیتر آب مقطر اضافه شد و تقطیر و تیتراسیون با دستگاه تمام اتوماتیک کجلدال انجام گرفت و مقدار نیتروژن موجود در برگ و ریشه طبق فرمول زیر (2-12)، بر حسب گرم درصد بیان شد ]امامی، 1375[.
B=1.401*m*v1/w*c*v2 (2-12)
که در آن:
M: مولاریته اسید
C: ظرفیت اسید
W: وزن نمونه گیاه جهت هضم بر حسب گرم
V1: حجم عصاره نهایی از مرحله هضم بر حسب میلی­لیتر
V2: حجم عصاره مورد استفاده جهت عمل تقطیر
2-8-3-پتاسیم
2-8-3-1- آماده کردن محلول‌های سنجش
1) محلول کلروسزیم با غلظت 87/0 گرم در لیتر: 1/1 گرم کلروسزیم صددرصد خاص در بالن ژوژه یک لیتری ریخته شد و با افزودن آب مقطر به حجم یک لیتر رسانده شد.
2) محلول استاندارد غلیظ پتاسیم به غلظت 5000 میلی گرم در لیتر (1): مقدار 534/9 گرم کلرور پتاسیم خشک شده در دمای 105 درجه سانتی ­گراد در آون را در بالن ژوژه‌ی یک لیتری ریخته شد و با بهره گرفتن از آب مقطر به حجم یک لیتر رسانده شد.
3) محلول استاندارد پتاسیم 500 میلی­گرم در لیتر (2): 100 میلی­لیتر از محلول استاندارد بالا در بالن ژوژه یک لیتری ریخته شد و با افزودن آب مقطر به حجم یک لیتر رسانده شد.
4) سری محلول‌های استاندارد (3): از محلول استاندارد 2، بترتیب مقادیر 0، 1، 2، 3، 4 و 5 میلی‌لیتر با پیپت برداشته شد و در بالن ژوژه‌ی 100 میلی‌لیتری با آب مقطر به حجم 100 میلی‌لیتر رسانده شد.
2-8-3-2- تعیین محتوای پتاسیم
مقدار 5 میلی‌لیتر از عصاره­های‌­ تهیه شده در بالن ژوژه‌­های 50 میلی‌لیتری با محلول کلروسزیم 87/0 گرم در لیتر به حجم رسانده شدند و سپس مقدار پتاسیم موجود در نمونه­ها با بهره گرفتن از دستگاه فلیم­ فتومتر (JENWAY مدل PFP7)، پس از کالیبره کردن دستگاه با محلول­های استاندارد و شاهد اندازه‌گیری و طبق فرمول زیر (2-13)، بر حسب گرم درصد محاسبه شد ]امامی، 1375[.
K٪ = (aDV)/(10000m) (100/D.m) (2-13)
که در آن:
a: عدد بدست آمده از منحنی
D: عدد رقت
V: حجم محلول حاصل از انحلال خاکستر
m: وزن نمونه گیاه که خاکستر شده